干粉培養(yǎng)基是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有水、氮源、無機(jī)鹽(包括微量元素)、碳源、生長因子(維生素、氨基酸、堿基、抗菌素、色素、激素和血清等)等。
干粉培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對(duì)一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長時(shí)間的貯存,必須放在3-6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管,均改制成粉末。
干粉培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件,有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或 pH 的改變。因此,培養(yǎng)基應(yīng)采用驗(yàn)證的滅菌程序滅菌,培養(yǎng)基滅菌方法和條件,應(yīng)通過無菌性試驗(yàn)和促生長試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。此外,對(duì)高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗(yàn)證,以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致干粉培養(yǎng)基的過熱,過度滅菌可能會(huì)破壞絕大多數(shù)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質(zhì)量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此,應(yīng)根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性,進(jìn)行全面的滅菌程序驗(yàn)證。
在制備干粉培養(yǎng)基的過程中,要使用一些玻璃器皿,如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據(jù)不同的情況,經(jīng)過一定的處理,洗刷干凈。干粉培養(yǎng)基有的還要進(jìn)行包裝,經(jīng)過滅菌等準(zhǔn)備就緒后,才能使用。
1、新購的玻璃器皿
除去包裝沾染的污垢后,先用熱肥皂水刷洗,流水沖凈,再浸泡于1~2%的工業(yè)鹽酸中數(shù)小時(shí),使游離的堿性物質(zhì)除去,再以流水沖凈。對(duì)容量較大的器皿,如大燒瓶、量筒等,洗凈后注入濃鹽酸少許,轉(zhuǎn)動(dòng)容器使其內(nèi)部表面均沾有鹽酸,數(shù)分鐘后傾去鹽酸,再以流水沖凈,倒置于洗滌架上將水空干,即可使用。
2、用過的玻璃器皿
凡確無病原菌或未被帶菌物污染的器皿,使用后可隨時(shí)沖洗,吸取過化學(xué)試劑的吸管,可先浸泡于清水中,待到一定數(shù)量后再集中進(jìn)行清洗。有可能被病原菌污染的器皿,必須經(jīng)過適當(dāng)消毒后,將污垢除去,用皂液洗刷,再用流水沖洗干凈。若用皂液未能洗凈的器皿,可用洗液浸泡適當(dāng)時(shí)間后再用清水洗凈。洗液的主要成份是重鉻酸鉀和濃流酸,其作用是將有機(jī)物氧化成可溶性物質(zhì),以便沖洗。洗液有很強(qiáng)的腐蝕作用,使用時(shí)應(yīng)特別小心,避免濺到衣服、身體和其他物品上。
應(yīng)確定每批干粉培養(yǎng)基滅菌后的 pH(冷卻至室溫 25℃測(cè)定)。若培養(yǎng)基處方中列出 pH 的范圍,除非經(jīng)驗(yàn)證表明培養(yǎng)基的 pH 允許的變化范圍很寬,否則,pH的范圍不能超過規(guī)定的±0.2。
制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行下列檢查:容器和蓋子不得破裂,裝量應(yīng)相同,盡量避免形成氣泡,固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪,干粉培養(yǎng)基在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶,不得污染微生物等。應(yīng)檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查。
培養(yǎng)基的貯存
自配的培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱、批號(hào)、配制日期等信息,并在已驗(yàn)證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有名稱、批號(hào)、生產(chǎn)日期、失效期及培養(yǎng)基的有關(guān)特性,生產(chǎn)商和使用者應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要求進(jìn)行保存,所采用的保藏和運(yùn)輸條件應(yīng)使成品培養(yǎng)基限度的失去水分并提供機(jī)械保護(hù)。
干粉培養(yǎng)基菌后若儲(chǔ)藏在高壓滅菌器中,質(zhì)量可能會(huì)受影響,一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不得在 0℃或 0℃以下存放,因?yàn)槔鋬隹赡芷茐哪z特性。