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一般我們購買商品化的primaryantibody的時候，抗體的說明書中都會給我們一個推薦的抗體使用濃度。這個濃度在一定程度上來說，是過飽和的，可以滿足大多數(shù)實驗的染色需求。但是因為是過飽和的濃度，這就帶來了一定程度的抗體浪費。而過量的抗體，也會大大提高樣本的自發(fā)熒光。從另一個角度來看，因為廠家給出的推薦濃度都是基于一個特定的樣本濃度和樣本體積，所以在一些特殊的實驗中，比如樣本濃度或樣本體積過大的實驗，推薦的濃度就無法達(dá)到飽和滴加的要求。在這樣的前提下，推薦實驗用戶針對自己的...

1.實驗進(jìn)行前，無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)10分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個細(xì)胞株之操作。2.無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取...

MEM細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)是實驗室里常見和基本的實驗了，但卻不是簡單的。別小看細(xì)胞培養(yǎng)，這里可蘊(yùn)含著大學(xué)問。有時候細(xì)胞狀態(tài)不好，轉(zhuǎn)染、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素很多，讓我們先從培養(yǎng)基和血清說起。經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，Invitrogen(GIBCO)、ThermoFisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)...

一、ELISA實驗中血清的采集、處理和保存1、真空采血針采集2ml新鮮血液，加入無菌試管中。2、采血后室溫靜置1小時。3、將采集血液用離心機(jī)4℃，2500rpm離心10min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。4、取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃下，可放置保存24-48小時；-20℃下，可放置保存1個月；-70℃下，可放置保存6個月。5、根據(jù)你的實驗需要，取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測定。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶...

玻璃器皿的清洗在制備培養(yǎng)基的過程中，要使用一些玻璃器皿，如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據(jù)不同的情況，經(jīng)過一定的處理，洗刷干凈。有的還要進(jìn)行包裝，經(jīng)過滅菌等準(zhǔn)備就緒后，才能使用。1、新購的玻璃器皿除去包裝沾染的污垢后，先用熱肥皂水刷洗，流水沖凈，再浸泡于１～２％的工業(yè)鹽酸中數(shù)小時，使游離的堿性物質(zhì)除去，再以流水沖凈。對容量較大的器皿，如大燒瓶、量筒等，洗凈后注入濃鹽酸少許，轉(zhuǎn)動容器使其內(nèi)部表面均沾有鹽酸，數(shù)分鐘后傾去鹽酸，再以流水沖凈，倒置于洗滌架...

出現(xiàn)問題出現(xiàn)問題的原因解決辦法曲線OD值不正常試劑盒未回溫試劑盒回溫到25℃溫度控制不好控制正確溫度孵育時間不準(zhǔn)確控制孵育時間洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干陽光直射，對著風(fēng)直接吹避風(fēng)避光酶標(biāo)儀的波長錯誤酶標(biāo)儀的波長450nm抗體的稀釋錯誤正確的稀釋抗體水質(zhì)問題用礦泉水代替白板洗滌液配制錯誤正確的配制洗滌液少加液體（抗體、酶標(biāo)記物、A液、B液）正確的步驟加液體錯加液體無梯度標(biāo)準(zhǔn)品也污染換標(biāo)準(zhǔn)品點板OD值不正?？刂茰囟葧r間在做一...

試劑，儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗一般均用板式點。本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用，兩者均有詳細(xì)的使用說明，嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。一、標(biāo)本的采取和保存可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)...

顯色培養(yǎng)基模擬灌裝應(yīng)盡可能地模擬產(chǎn)品本身所經(jīng)歷的與設(shè)備接觸的表面、容器密封系統(tǒng)、關(guān)鍵環(huán)節(jié)和關(guān)鍵工藝操作的接觸，根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝類型，確認(rèn)無菌生產(chǎn)工藝的模擬灌裝操作步驟，因凍干粉針劑無菌生產(chǎn)工藝是相對齊全的無菌生產(chǎn)工藝，下面以此為例，簡介一下培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的關(guān)注點。顯色培養(yǎng)基模擬灌裝試驗主要應(yīng)關(guān)注以下內(nèi)容但不是全部，生產(chǎn)線的狀態(tài)、試驗的頻率、培養(yǎng)基類型、灌裝持續(xù)時間、灌裝的數(shù)量、容器（西林瓶）體積、生產(chǎn)線速度、灌裝體積、挑戰(zhàn)性試驗、培養(yǎng)、結(jié)果與評級、清場和清洗、模擬灌裝中...